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稳定同位素内标应选择同位素丰度>98%以上的标准品

更新时间:2022-08-25   点击次数:272次
  稳定同位素内标记化合物与对应的未标记化合结构相似,所以理化性质也极为相似,如果将稳定同位素标记物与对应的未标物用同样的色谱方法检测,其保留时间也几乎一致,无法分辨。且稳定同位素不具有放射性,无论在标记化合物合成、分离提纯及应用过程中均无特殊防护要求,可作为内标用于临床医学研究及生物医学、环境科学、食品检测等诸多领域。
  如何挑选稳定同位素内标
  1、应尽量选择同位素丰度>98%以上的标准品。
  2、如果选择氘代产品作为内标,需选择质量差大于3(D3)以上的产品。
  3、13C,15N通常标记在分子的骨架结构上,其标记位点较为稳定,氘代产品容易与液相流动相溶剂中的活泼氢发生交换,因此稳定性不如13C,15N。如图3,草甘膦如果用D标记的话,羧基、亚氨基、羟基上面的D都属于活泼位点,很容易脱离母体化合物,所以安谱实验选择13C,15N来进行标记。另外考虑到氘标记物的合成较为简便,价格便宜,因此在氘标记物能够满足实验需求的情况下,也常选用氘标记物作为内标物。
  4、标记位点还应远离容易发生化学键断裂的位置,以避开同位素效应的影响。在质谱中邻苯二甲酸二甲酯的酯基容易断裂,所以安谱实验选择氘标记在苯环上。如果母体化合物因化学键断裂同时生成2个重要子单元结构化合物,可选择双标记母体化合物。
  稳定同位素内标是质谱方法,没有别的临床检测方法用到同位素内标。比如光吸收和免疫的方法,都无法分辨出被检测物和同位素内标的区别,因为它们的理化性质太接近了。如果真的加进内标,那测出来的值肯定大大的偏高。只有质谱才能把同位素内标和要检测的物质分得开,虽然它们的差别只有几个道尔顿。现在的内标基本都是稳定同位素标记的,最常见的是D和13C。同位素内标和被检测物是同一个物质,但是其中的几个氢原子被氘所取代,或者是12C换成了13C,理化性质基本不变。